PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室,PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的簡稱,是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DNA片段,從而PCR實(shí)驗(yàn)室被廣泛應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域,由此可見該實(shí)驗(yàn)室需要整體規(guī)劃的重要性。
一、避免污染是PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)考慮的重點(diǎn)
由于PCR技術(shù)的高度敏感性,PCR技術(shù)要求高、影響因素多,從樣品制備到結(jié)果的產(chǎn)生,任何一處細(xì)微的失誤均會(huì)造成結(jié)果的偏差,導(dǎo)致樣品的假陽性和假陰性結(jié)果。
在PCR實(shí)驗(yàn)室研究過程中,很多操作都會(huì)產(chǎn)生氣溶膠,比如離心、混勻等操作閔,為保證環(huán)境安全,PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)需獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì),避免與其余環(huán)境的交叉混雜。
二、PCR實(shí)驗(yàn)室區(qū)域劃分
1、功能劃分 試劑準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)一區(qū)、純化區(qū)、擴(kuò)增反應(yīng)二區(qū)以及后純化區(qū)。
2、設(shè)計(jì)原則 按國家衛(wèi)生部的要求,各實(shí)驗(yàn)區(qū)域需要是相互獨(dú)立的,不能直通,每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)有 專門的閘間供工作人員換工作服和鞋,進(jìn)入各工作區(qū)域需要嚴(yán)格遵循單一方向順序,即只能從左邊試劑準(zhǔn)備區(qū),標(biāo)本制備區(qū),擴(kuò)增反應(yīng)一區(qū),純化區(qū),擴(kuò)增反應(yīng)二區(qū)到后純化區(qū),避免發(fā)生交叉污染。
3、為避免樣本間的交叉污染,房間采取凈化控制,總體設(shè)計(jì)為10萬級(jí)。閘間(緩沖間)設(shè)計(jì)為正壓區(qū),保證與外界環(huán)境隔離,避免從鄰近區(qū)域進(jìn)入本區(qū)域的氣溶膠污染。
三、氣流設(shè)計(jì)
人流物流設(shè)計(jì)各行其道,避免交叉混雜,整個(gè)區(qū)域設(shè)計(jì)一個(gè)公用走廊,工作區(qū)域之間設(shè)計(jì)試劑物品傳遞專用窗,做到人物分流。
四、壓差設(shè)計(jì)
PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)計(jì)為負(fù)壓潔凈室,通過壓差控制,使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染,并且降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。各個(gè)實(shí)驗(yàn)室與非潔凈區(qū)之間的閘間保持正壓,>10Pa,實(shí)驗(yàn)與閘間之間的氣流組織方向?yàn)樵噭?zhǔn)備區(qū)空氣流向閘間,標(biāo)本制備區(qū)流向閘間,而PCR擴(kuò)增區(qū)氣流方向由閘間流向PCR擴(kuò)增區(qū),純化區(qū)同理。
五、其它安全設(shè)施
PCR實(shí)驗(yàn)室為潔凈空調(diào)系統(tǒng),系統(tǒng)形式采用直流系統(tǒng)不回風(fēng),防止交叉污染;試劑準(zhǔn)備間設(shè)計(jì)超凈臺(tái),保證試劑免受空氣環(huán)境污染;標(biāo)本制備間設(shè)計(jì)生物安全柜,保證標(biāo)本不污染室內(nèi)環(huán)境,并保證標(biāo)本免受環(huán)境污染。