細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃設(shè)計(jì)基本要求

實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔，空氣清新，干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動(dòng)的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。

常用設(shè)施及設(shè)備 

(1)超凈工作臺：也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式，直流式和外流式三大類。

(2)無菌操作間：一般由更衣間，緩沖間和操作間三部分組成。操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱，離心機(jī)，倒置顯微鏡等。緩沖間可放置電冰箱，冷藏器及消毒好的無菌物品等。

(3)操作間：普通培養(yǎng)箱，離心機(jī)，水浴鍋，定時(shí)鐘，普通天平及日常分析處理物。

(4)洗刷消毒間：烤箱，消毒鍋，蒸餾水處理器及酸缸等。

(5)分析間：顯微鏡，計(jì)算機(jī)及打印機(jī)等。

培養(yǎng)器皿 

常用細(xì)胞培養(yǎng)器皿有培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)板，培養(yǎng)皿等。常準(zhǔn)備量是使用量的三倍，器皿應(yīng)選擇透明度好，無毒，利于細(xì)胞粘附和生長的材料，常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品。常用的器皿有下面幾種：

(1)液體儲(chǔ)存瓶：用于儲(chǔ)存各種配制好的培養(yǎng)液，血清等液體，常用規(guī)格有500ml，250ml， 100ml等幾種. 

(2)培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細(xì)胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位,規(guī)格有200ml，100ml，50ml，25ml，10ml等幾種。

(3)培養(yǎng)皿：用于開放式培養(yǎng)及其它用途，分直徑30mm，60mm，120mm等幾種。

(4)吸管：常用的有長吸管和短吸管兩類，長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管,刻度吸管用于移動(dòng)液體。常用1ml和10ml兩種，短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。

(5)離心管：離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用最廣泛的器皿，根據(jù)用途不同形態(tài)各樣，常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類.前者分別為50ml，30ml，15ml；后者則多為10ml和5ml。

(6)其它：如三角燒瓶，燒杯，量筒，漏斗，注射器等。

細(xì)胞培養(yǎng)溫度 

 維持培養(yǎng)細(xì)胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細(xì)胞對培養(yǎng)溫度要求也不同。

人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。

培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力較對高溫強(qiáng)，溫度上升不超過39℃時(shí)，細(xì)胞代謝與溫度成正比；人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí)，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時(shí)，細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時(shí)，細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷，大部分細(xì)胞死亡，個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí)，細(xì)胞全部死亡。

相反，溫度不低于0℃時(shí)，對細(xì)胞代謝雖有影響，,但并無傷害作用；把細(xì)胞放入25-35℃時(shí)，細(xì)胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時(shí)后，再回到37℃培養(yǎng)，細(xì)胞仍能繼續(xù)生長。

細(xì)胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護(hù)劑(二甲亞砜或甘油)，可在深低溫下如-80℃或-196℃(液氮)長期保存。

合適的氣體環(huán)境 

氣體是哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。

氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。

開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，也是細(xì)胞生長繁殖所需成分，它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的pH值。

大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4，偏離這一范圍對細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些，在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。但有一些細(xì)胞也喜歡偏堿環(huán)境中生長，如成纖維細(xì)胞最適合pH是7.4-7.6。每種細(xì)胞都有其最適pH值。